Podczas gdy pająki są często cenione za oferowane przez nie usługi zwalczania szkodników, pająki są ofiarami wielu zwierząt, w tym ptaków, jaszczurek, żab, a nawet większych pająków. Niektóre zwierzęta, takie jak jastrzębie Tarantula składaj jaja w ciałach pająków. Po wykluciu się jaj niemowlęta żywią się tkankami wewnętrznymi pająka.
Jaszczurki są drapieżnikami pająków. Mimo że nie szukają pająków, chętnie je konsumują, gdy nadarzy się okazja. Według Lisa Jo Lupo, autorki portalu About.com, jaszczurki wprowadzone na Bahamy z powodzeniem wykorzeniły gatunki pająków orbitalnych w ciągu około pięciu lat. Wiele gatunków ptaków, w tym rudziki, strzygi i przedrzeźniacze, regularnie spożywa pająki. Ptaki muszą uważać, aby uniknąć lepkich pasm pajęczych pajęczyn, ale niektóre ptaki wykorzystują jedwab z tych wstęg, aby wyłożyć ich gniazda.
Centipedes i skorpiony również polują na pająki. Używają własnego jadu, aby zdobyć i pokonać swoją pajęczą zdobycz. Małpy i inne małe naczelne okazjonalnie również jedzą pająki i preferują większe gatunki pająków.
Pająki mają wiele mechanizmów obronnych, które pomagają im unikać drapieżników. Oprócz ich jadu, niektóre pająki mają odważne kolory, które ostrzegają o ich jadowitym ugryzieniu. Wiele pająków ma również nocny tryb życia, co może pomóc im uniknąć codziennych drapieżników.
