Spektrofotometr służy do pomiaru intensywności światła lub ilości fotonów, absorbowanych przez obiekt próbki lub ilość fotonów odbitych od obiektu próbki. Instrument składa się ze spektrometru do produkcji światła i fotometru do pomiaru natężenia światła.
Spektrofotometr przepuszcza wiązkę światła przez obiekt próbki i mierzy intensywność światła docierającego do detektora. Spektrofotometr można sklasyfikować jako spektrofotometr IR lub spektrofotometr UV-Vis, w zależności od zakresu długości fali źródła światła.
Podstawową zasadą spektrofotometrii jest to, że każdy związek transmituje lub absorbuje światło o określonej długości fali. Spektrofotometria jest użyteczną metodą analizy ilościowej w dziedzinach takich jak biochemia, fizyka i chemia.