Atrament z Indii, Kongo czerwony i Eosin mogą być stosowane jako alternatywne barwniki zamiast Nigrosin do negatywnego barwienia. Tusz z Indii działa dobrze, ale jego drobne cząsteczki powodują ruch Browna, co sprawia, że identyfikacja bakterii trochę trudne.
Negatywne plamy nie plamią komórek bakterii, które są naładowane ujemnie, ale tło wokół komórek. Pod mikroskopem komórki pojawiają się jako bezbarwne kontury na ciemnym tle. Ta metoda barwienia jest używana do badania próbek, które nie mogą być utrwalone alkoholem lub ciepłem, aby możliwe było oglądanie żywej komórki.
Niektóre bakterie mają struktury zewnątrzkomórkowe zwane kapsułkami, które łatwo można zniszczyć przez pranie i ogrzewanie. Aby zidentyfikować, czy bakterie z próby mają kapsułki, stosuje się łagodną technikę z zastosowaniem ujemnego barwnika.
