Roztwór jodu działa jak zaprawa, która sprawia, że plama jest bardziej widoczna, a barwnik fioletu krystalicznego staje się ściślej związany z komórką bakteryjną. Dodawanie roztworu jodu lub chlorku potasu to drugi etap proces barwienia barw.
Barwienie metodą Grama jest powszechną i najczęściej stosowaną techniką stosowaną do różnicowania bakterii Gram-ujemnych i Gram-dodatnich. Proces ten opiera się na zasadzie, że bakterie reagują inaczej na otoczenie, a zatem inaczej reagują (lub barwią), pomagając w ich identyfikacji.
Proces barwienia ziarna obejmuje następujące kroki:
Krok 1
Bakterie są traktowane barwnikiem fioletu krystalicznego, a następnie roztworem jodu.
Krok 2
Po zabarwieniu do próbki dodaje się środki odbarwiające. To odwadnia, kurczy i napina warstwę peptydoglikanu bakterii. Środki barwiące są uwięzione w komórkach bakterii Gram-dodatnich ze względu na grubszą warstwę peptydoglikanu, podczas gdy bakterie Gram-ujemne nie będą w stanie utrzymać plamy z powodu cienkiej warstwy.
Krok 3
Barwnik jest dodawany do próbki barwiącej ją na czerwono. Czerwone zabarwienie nie zmienia barwy fioletowego zabarwienia komórek Gram-dodatnich. Odwrotnie, dodaje czerwony kolor bakteriom Gram ujemnym.
