Polimeraza DNA II to rodzaj polimerazy DNA: kategoria enzymów, które syntetyzują identyczne kopie istniejącego DNA, umożliwiając dzielącym się komórkom przekazywanie tej informacji genetycznej do ich komórek potomnych. Polimeraza II DNA występuje tylko w organizmach prokariotycznych lub organizmach jednokomórkowych, takich jak archeony, i prostych bakteriach, które nie mają jąderek i organelli związanych z błoną.
Prokarionty mają pięć znanych typów polimerazy DNA o numerach od 1 do V. Polimerazy DNA replikują DNA przez syntezę sekwencji nukleotydów, cząsteczkowych składników DNA. W DNA są tylko cztery typy nukleotydów. Specyficzna kolejność tych nukleotydów jest kodem genetycznym, który kontroluje tworzenie, utrzymanie i działanie wszystkich żywych komórek. Polimeraza DNA odczytuje kolejność tych nukleotydów i dokładnie je kopiuje, aby utworzyć nowe nici DNA.
Polimeraza DNA II została odkryta w bakteriach E. coli przez Thomasa Kornberga w 1970 roku. Polimeraza DNA II wspomaga aktywność polimerazy DNA III, która jest głównym enzymem replikującym DNA u prokariotów. Jeśli uszkodzony DNA zatrzymuje rozwój polimerazy DNA III, polimeraza II DNA odgrywa rolę w ponownym wprowadzaniu syntezy w innym miejscu w nici DNA, pozwalając polimerazie III DNA kontynuować replikację poza uszkodzonym obszarem.
Polimeraza DNA II sprawdza również świeżo zsyntetyzowane nici DNA pod kątem dokładności. W przypadku jakichkolwiek błędów w replikacji, polimeraza DNA II usuwa i odrzuca segment niedokładnego DNA.