Irokezi wierzyli w wiele bóstw, z których najważniejszym jest stwórca istot ludzkich, roślin, zwierząt i dobra na świecie, znanego jako Wielki Duch. Chociaż nie wierzyli, że ludzie mogą bezpośrednio komunikować się z tymi duchami, wierzyli, że jest to możliwe poprzez palenie tytoniu.
Irokezi mieli wielką cześć dla swoich snów, interpretowali i szukali w nich znaków. Nie mieli księży ani szamanów w pełnym wymiarze godzin, ale zamiast tego wyznaczyli specjalistów od spraw płci męskiej i żeńskiej do prowadzenia ceremonii religijnych.
Irokezi stworzyli "Fałszywe maski", które były twarzami wykutymi w stojących drzewach, a następnie pocięte, udekorowane i noszone później. Maski te reprezentowały duchy, które pojawiły się u rzeźnika podczas wcześniejszego ceremoniału tytoniu.
Ludzie w plemieniu polowali i łowili ryby, budowali domy, czyścili pola do sadzenia, handlowali z obcymi i brali udział w każdej wojnie. Kobiety hodowały, wychowywały dzieci, przygotowywały posiłki, robiły kosze i inne przybory.
Wiele części kultury Irokezów dotyczyło aspektów matrylinearnych. Chociaż ludzie żonaty i rozwiedziony, a mężczyźni często mieli wiele żon, po rozwodzie dzieci pozostały z matką. Dziedziczenie również postępowało zgodnie z tym schematem, a własność trafiała do kobiet.
Irokezi nie stosowali żadnych znanych sformalizowanych rytuałów przejścia, poza tymi, którzy zajmowali pozycję polityczną.
