W dramacie Shakesperian "Makbet", Macduff wybiera ucieczkę do Anglii w odpowiedzi na morderstwo Duncana przez Makbeta, by poprzeć Malcolma, syna i spadkobiercę Duncana. Uciekając jednak do Anglii, Macduff potępia własną rodzinę, która zostaje zamordowana przez Makbeta w odpowiedzi. Uciekając do Anglii, Macduff próbuje przekonać Malcolma do odzyskania szkockiego tronu z pokazem siły.
W sztuce pierwszy dialog Macduffa dotyczy odkrycia trupa Króla Duncana w zamku Makbeta. Jego decyzja o ucieczce do Anglii wynika z jego podejrzenia, że Makbet był w rzeczywistości mordercą Duncana. Będąc w Anglii i usiłując przekonać Malcolma do działania, Macduff zostaje poinformowany o śmierci swojej rodziny i konsekwencji jego działania przez inny szkocki thane o imieniu Ross.
Macduff wraca do Szkocji wraz z Malcolmem i ich angielskimi sojusznikami oraz spotyka Makbeta w bitwie pod Dunsinane Castle. Macduff w końcu zabija Makbeta, choć w sztuce zdarza się to poza sceną. Następnie przedstawia swoją głowę Malcolmowi i ogłasza go prawowitym królem Szkocji.
Przed zamordowaniem króla Duncana przez Makbeta, Macduff posiadał tytuł Thane'a z Fife. Pierwsze wzmianki o Macduff można znaleźć w XIV-wiecznej pracy "Chronica Gentis Scotorum".
