Masło i margaryna różnią się przede wszystkim rodzajem tłuszczu, z którego są wykonane, ponieważ masło wytwarza się z tłuszczu zwierzęcego, a margaryna wytwarza się z oleju roślinnego. Wpływa to na ich teksturę, smak i odżywianie.
Masło wytwarza się z mleka lub śmietany w procesie mieszania, który oddziela tłuszcz maślany od maślanki. Margaryna jest wytwarzana z oleju roślinnego, wody, soli i emulgatorów, chociaż składniki różnią się w zależności od marki. Podczas gdy masło zawiera cholesterol i nasycony tłuszcz, margaryna nie. Jednak margaryna jest wyższa w wielonienasyconych i jednonienasyconych tłuszczach i może zawierać tłuszcz trans. Masło zawiera również witaminy takie jak A, D, E i K. Zarówno masło, jak i margaryna muszą zawierać 80% tłuszczu.